В МГУ усовершенствовали метод оценки функции тромбоцитов

Источник фото: ru.123rf.com

Ученые из МГУ с коллегами изучили преимущества метода малоуглового рассеяния частиц для оценки функции тромбоцитов. Полученные результаты могут лечь в основу внедрения метода в клиническую практику. Итоги исследования, поддержанного Российским научным фондом, а также фондом «Наука — детям», опубликованы в журналах International Journal of Hematology и «Вестник Московского университета». 

Тромбоциты — это форменные элементы крови, которые отвечают за остановку кровотечений. Задачами этих клеток являются формирование пробки-агрегата и адгезия к месту повреждения сосуда. Если тромбоциты гиперактивны или присутствуют в крови в повышенной концентрации, то риск формирования тромба увеличивается. Наоборот, снижение количества или функциональной активности тромбоцитов может провоцировать склонность к кровотечениям. Для клинических исследований необходим метод, который позволял бы давать полноценную оценку функции тромбоцитов как здоровых добровольцев, так и пациентов любого возраста. Способы анализа статуса тромбоцитов представлены широко (агрегометрия по Борну, проточная цитометрия и т.д.), однако ни один из них не свободен от недостатков, поэтому сейчас идет активная разработка новых более совершенных методик. 

Одной из таких методик потенциально может стать метод малоуглового рассеяния. Метод устроен следующим образом: в кювету помещается суспензия частиц, которая постоянно перемешивается, что обеспечивает имитацию условий сдвига в потоке крови. На кювету направляется луч света, испущенный лазером, рассеянное излучение попадает на массив фотодетекторов за кюветой — таким образом получается набор значений сигнала интенсивности света для разных углов рассеяния. Сигнал конвертируется аналого-цифровым преобразователем и передается на компьютер. На экране монитора наблюдают кривые интенсивности светорассеяния в зависимости от времени для углов от 0° до 12° с шагом в 0,25°.

Специальное программное обеспечение обрабатывает эти данные и вычисляет распределение размеров частиц в суспензии. Метод малоуглового рассеяния может применяться для задач нефтехимической, химической и пищевой промышленности, а также в других областях. Применительно к биофизическим задачам, в частности к анализу тромбоцитов, метод впервые был применен в 2012 году научной группой из Института эволюционной физиологии и биохимии имени И.М. Сеченова РАН. Группа исследователей под руководством Игоря Миндукшева показала, что по зависимости сигнала интенсивности светорассеяния от времени можно судить об агрегации тромбоцитов в динамике. 

«Наша основная цель состояла в сравнении метода малоуглового рассеяния с другими методами оценки функции тромбоцитов, а также в определении оптимальных параметров для его использования. Есть множество параметров, от которых будет зависеть чувствительность метода, и определение рабочих диапазонов — большой шаг в сторону стандартизации метода», — рассказала выпускница аспирантуры кафедры медицинской физики физического факультета МГУ, младший научный сотрудник Центра теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН Галина Свидельская.

Впервые была исследована зависимость параметров эксперимента от времени, которое проходило с момента получения образца (богатой тромбоцитами плазмы) до измерения. Оказалось, что даже в течение двух часов после забора крови тромбоциты остаются функциональными, то есть продолжают агрегировать при индуцировании этого процесса.

Следующий вопрос, которым задались ученые, — какое количество плазмы человека нужно добавить в измерительную кювету, чтобы параметры агрегации были достоверными и клинически значимыми. Было установлено, что зависимость выходит на насыщение при больших значениях концентрации плазмы. Таким образом, удалось определить оптимальный диапазон концентрации тромбоцитов для дальнейшей работы.

Кроме того, были проанализированы тромбоциты у здоровых взрослых, здоровых детей и педиатрических пациентов (детей с отклонениями от нормы). Оказалось, что метод позволяет обнаружить серьезные отклонения от нормы (например, слабую агрегацию тромбоцитов при тромбастении Гланцмана). Если же у пациентов имеются болезни, которые не связаны напрямую с агрегацией, то отличить их от здоровых пациентов с помощью данного метода затруднительно.

Наконец, было проведено сопоставление метода малоуглового рассеяния с используемым в клинике методом световой трансмиссионной агрегометрии. Оказалось, что коэффициенты корреляции лежат в диапазоне от 0.5 до 0.6 в когорте здоровых добровольцев, что означает умеренное согласие в показаниях разных методов. При этом на пациентах с отклонениями показания этих методов сходятся уже не так хорошо. 

Метод световой трансмиссионной агрегометрии для оценки функции тромбоцитов в клинических исследованиях – «золотой стандарт». При равных показателях определения наличия или отсутствия болезни у метода малоуглового рассеяния есть два преимущества по сравнению с агрегометрией. Первый — возможность применения для людей с низкой концентрацией тромбоцитов. Второй — для метода малоуглового рассеяния требуется небольшое количество образца. Это может быть удобно в педиатрии, когда у детей сложно взять большой объем крови для анализа.

«Мы планируем продолжать развивать и тестировать метод. Сейчас мы ведем проект по анализу функции тромбоцитов в тромбоконцентратах. Например, при массивных кровотечениях (при травмах, хирургических осложнениях, родах и т.д.) переливание компонентов крови может быть частью комплексной терапии для поддержания гемостаза. Дискуссии о том, какие условия хранения образцов концентрата тромбоцитов оптимальны, не утихают. Метод малоуглового рассеяния открывает новые перспективы в оценке и подборе условий хранения тромбоконцентрата», — резюмировала Галина Свидельская. 

Информация предоставлена пресс-службой МГУ

Источник фото: ru.123rf.com